Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Медицина arrow Enterobacteria как возбудители кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных

Дифференциально-диагностические среды

Среда Штерна. Используют для дифференциации сальмонелл.

К 1000 мл МПБ или бульона Хоттингера добавляют 2,5 мл 10 %-ного насыщенного спиртового раствора основного фуксина, 16,6 мл 10%-ного водного раствора сульфита натрия (Na2S04) и 10 мл глицерина. Разливают по пробиркам и стерилизуют 15 мин при 112 °С. Готовая среда имеет желтую окраску. Если испытуемая культура относится к Salmonella typhimurium, которая способна ферментировать глицерин, то среда приобретает фиолетовый оттенок.

Среда Биттера. Используют для дифференциации сальмонелл.

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 0,05 г пептона, 0,5 г трехосновного лимоннокислого натрия (цитрат натрия), 5 г хлорида натрия, 5 г рамнозы (или арабинозы). Кипятят на водяной бане 3--5 мин, фильтруют через бумажный фильтр. Разливают по пробиркам и стерилизуют 30 мин при 112°С или текучим паром 3 дня по 30 мин. Если испытуемая культура относится к сальмонеллам, способным ферментировать рамнозу или арабинозу (S. typhimurium), то при добавлении к суточной культуре (выращенной на данной среде) 2 капель 0,5 %-ного спиртового раствора метилового красного среда приобретает красную окраску.

Среда для посева по Свену - Гарду. Используют для выявления у сальмонелл специфической фазы жгутикового антигена.

К 1000 мл МПБ или бульона Хоттингера добавляют 8 г агара и растворяют путем кипячения на водяной бане. Устанавливают рН 7,2-7,4, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют 30 мин при 121 С.

Среды с аминокислотами. Используются для определения способности энтеробактерий в анаэробных условиях расщеплять левовращающие аминокислоты - лизин, орнитин, аргинин.

В 600 мл дистиллированной воды растворяют 5г пептона и 1г глюкозы, устанавливают рН 6,0-6,1. Приготовленный раствор разливают по 150мл в четыре колбы. В каждую из трех колб вносят по 10г одной из аминокислот. Четвертая колба остается в качестве контрольной. Содержимое всех колб кипятят на водяной бане 5-10 мин, устанавливают рН 6,0--6,1. Во все четыре колбы вносят по 0,6 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромкрезолового пурпурного или бромтимолового синего и по 5 мл 0,1 %-ного спиртового раствора крезолового красного. Разливают в агглютинационные пробирки по 2--3 мл. Стерилизуют 30 мин при 110°С.

Для проведения теста в пробирки, содержащие аминокислоту, и в контрольную пробирку засевают испытуемую культуру, после чего заливают стерильным вазелиновым маслом (слоем толщиной 10 мм) и инкубируют. Учет проводят в течение 4 сут. При положительной реакции среды с аминокислотами приобретают фиолетовую или синюю (если в качестве индикатора взят бромтимоловый синий) окраску, в контрольных пробирках среда имеет желтую окраску.

Состав 1,6 %-ного спиртового раствора бромкрезолового пурпурного: бромкрезоловый пурпурный-- 1,6 г, спирт этиловый 96° -- 100 мл.

Состав 0,1 %-ного спиртового раствора крезолового красного: крезоловый красный -- 0,1 г, спирт этиловый 96 -- 100 мл.

Среда с калием цианидом. В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия, 0,225 г дигидрофосфата калия (КН2Р04), 5,64 г гидрофосфата натрия (Na2HP04). Устанавливают рН 7,6, фильтруют через бумажный фильтр и стерилизуют 30 мин при 112°С. После стерилизации быстро охлаждают. Среду этого состава используют в качестве контрольной. Непосредственно перед применением к 100 мл среды асептически добавляют 1,5 мл свежеприготовленного 0,5 %-ного водного раствора калия цианида (KCN), разливают по пробиркам и закрывают корковыми пробками.

Положительный результат отмечается, если через 24--48 ч после посева культуры в среде с калием цианидом заметно помутнение или опалесценция. При отрицательном результате среда остается абсолютно прозрачной, в то время как в контрольной пробирке заметно помутнение.

Примечание: среда высокотоксична.

 
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Предыдущая   СОДЕРЖАНИЕ   Следующая >
 

СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ
Enterobacteria как возбудители кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных