Меню
Главная
Авторизация/Регистрация
 
Главная arrow Сельское хозяйство arrow Исследование иммунной системы животных

Общий иммунный анализ крови у животных

Подсчет количества лейкоцитов производится в камере с сеткой Горяева. Относительное количество видов лейкоцитов определяется посредством микроскопии мазков крови, которые изготавливаются, фиксируются и окрашиваются по уже отработанной нами схеме. Дифференциация лейкоцитов проводится по морфологическим признакам, результат заносится в таблицу Егорова или фиксируется на клавишном счетчике.

Лейкограмма дает представление об относительном (в процентах) содержании различных видов лейкоцитов в крови, в т.ч. и лимфоцитов. Полученное процентное содержание лимфоцитов характеризуется как их относительная величина в популяции лейкоцитов крови. Зная общее количество лейкоцитов и относительное содержание лимфоцитов, вычисляется абсолютное число видов лейкоцитов, в т.ч. и лимфоцитов.

Определение относительного и абсолютного количества Т- и В- лимфоцитов крови. Т- и В-популяции лимфоцитов мало различимы при световой микроскопии. Вместе с тем эти клетки имеют отчетливые антигенные и функциональные различия. Т-лимфоциты обеспечивают клеточные реакции иммунитета, в частности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и реакции трансплантационного иммунитета. В-лимфоциты преимущественно отвечают за гуморальное звено иммунитета, они являются предшественниками антителпродуцирующих клеток.

Одним из методов определения числа Т- и В-лимфоцитов в крови является реакция розеткообразования. Суть феномена состоит в том, что при контакте Т-лимфоцитов с эритроцитами барана клетки формируют образования, напоминающие тутовую ягоду, которые принято называть розетками. В-лимфоциты также могут формировать розетки, но для этого нужны более сложные условия: эритроциты нагружаются комплексом аниген- антитело-комплемент.

Методика определения количества Т- и В-лимфоцитов включает следующие этапы:

  • - выделение лимфоцитов из периферической крови (отделение плазмы крови с лейкоцитами от эритроцитов, выделение лимфоцитов из крови на градиентах плотности центрифугированием, определение количества и жизнеспособности лимфоцитов);
  • - определение количества Т-лимфоцитов (приготовление эритроцитов барана, смешивание взвеси лимфоцитов и суспензии эритроцитов, приготовление, фиксация и окрашивание мазков, идентификация Т-лимфоцитов по образованию розеток (Е-РОК), расчет относительного и абсолютного количества клеток);
  • - определение количества В-лимфоцитов (приготовление эритроцитов барана, нагруженных комплексом анитело + комплемент, смешивание и инкубирование взвеси лимфоцитов и суспензии эритроцитов, приготовление, фиксация и окрашивание мазков, идентификация клеток по выявлению рецепторов к третьему компоненту комплемента (ЕАС-РОК), расчет количества В-лимфоцитов).

Определение фагоцитарной активности лейкоцитов (фагоцитарное число, фагоцитарный индекс).

Фагоцитарная активность лейкоцитов максимально выражена у нейтрофилов и, в меньшей мере, у моноцитов и зозинофилов. Фагоцитарная активность лейкоцитов зависит не только от функциональной активности клеточных элементов, но и от состояния внутренней среды организма. Интенсивность же фагоцитоза в значительной степени обусловлена активностью самих клеточных элементов.

Наибольшее распространение получила методика определения фагоцитарной активности клеток крови по Кост и Стенко. Принцип методики основан на том, что при контакте с чужеродными частицами гранулоциты и моноциты поглощают (фагоцитируют) и разрушают их внутриклеточными ферментами. Рассчитывают фагоцитарная активность, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс (ФИ) нейтрофилов.

Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови.

В ветеринарной лабораторной практике существует несколько методов определения иммуноглобулинов.

  • 1. Количественное определение иммуноглобулинов методом радиальной иммунодиффузии в геле, содержащем моноспецифичную иммунную сыворотку (по Манчини). Суть методики: на стекляные пластины разливают раствор агара, содержащий моноспецифичную сыворотку, после застывания, в агаре делают лунки, в которые вносят исследуемую сыворотку крови животных. Затем пластины помещают во влажную камеру при 37оС и инкубируют в течение определенного времени. Далее замеряют диаметр образовавшихся колец преципитатов. В качестве стандарта используется сыворотка с известным количеством определенного иммуноглобулина.
  • 2. Определение иммуноглобулинов методом дифференциального электрофореза в полиакриламидном геле (в модификации В.М.Холода, 1983). Принцип метода: разделяют белки в зависимости от заряда белковой мицеллы и размера молекулы.
  • 3. Определение иммуноглобулинов в сыворотке крови путем осаждения цинком сульфатом или натрия сульфитом. Принцип метода основан на том, что при добавлении цинка сульфата или натрия сульфита происходит осаждение из сыворотки иммуноглобулинов. Образующееся при этом помутнение, интенсивность которого зависит от концентрации иммуноглобулинов, можно оценить с помощью колориметра или нефелометра. Методы эти простые, но недостаточно специфичные.

При некоторых патологических расстройствах наблюдаются значительные отклонения уровней иммуноглобулинов в крови. Концентрация Ig G возрастает во время инфекционных заболеваний, при некоторых болезнях печени и аутоиммунных растройствах. Уровень этих иммуноглобулинов снижается при гипо- и агаммаглобулинемиях, задержке развития и некоторых опухолях лим- фоидной системы.

Концентрация Ig M повышается при инфекционных заболеваниях, поражающих систему крови, при острых гепатитах и первичном билиарном циррозе. Снижается - при гипо- и агаммаглобулинемиях, некоторых опухолях лимфоидной системы.

Уровень сывороточного Ig A возрастает при заболеваниях дыхательных путей и кишечного тракта, при перитониальных инфекциях. Снижается - при гипо- и агаммаглобулинемиях, некоторых опухолях лимфоидной системы.

 
Если Вы заметили ошибку в тексте выделите слово и нажмите Shift + Enter
< Предыдущая   СОДЕРЖАНИЕ
 
СКАЧАТЬ ОРИГИНАЛ
Исследование иммунной системы животных